„Nový program diagnostiky a léčby koronárního viru pneumonie (zkušební deváté vydání)“ používá hodnotu Ct detekce nukleové kyseliny ≥35 jako jeden z důležitých základů pro uvolnění řízení izolace nebo propuštění.Co tedy představuje hodnota Ct soupravy pro detekci nukleových kyselin?Jsou hodnoty Ct různých souprav srovnatelné?Čím nižší je hodnota Ct, tím lepší je výkon soupravy?
Hodnota Ct (Threshold Cycle, Ct) je počet cyklů PCR, kdy intenzita fluorescenčního kvantitativního fluorescenčního signálu v reálném čase překročí nastavenou prahovou hodnotu.Soupravy pro detekci nukleových kyselin berou jako příklad novou korunku.Pro stejnou reakci stejné soupravy pro detekci dvou vzorků obsahujících virus, A a B, představuje velikost hodnoty Ct do určité míry počet kopií virového genu, tedy virovou zátěž.Čím nižší je Ct vzorku B, tím vyšší je virová zátěž.Hodnota Ct je nepřímo úměrná virové náloži a její infekčnosti.Klady a zápory různých fluorescenčních kvantitativních souprav v reálném čase nelze posuzovat pouze podle velikosti hodnoty Ct, protože hodnoty Ct různých souprav nejsou srovnatelné.Hodnocení funkčnosti soupravy je třeba měřit z hlediska citlivosti (minimální detekční limit), specifičnosti, preciznosti, stability a diagnostické aplikace.Každý výrobce činidel má svých osmnáct druhů bojových umění a mají své vlastní magické schopnosti v aplikaci, takže zde nebudu zabíhat do podrobností.
U konvenčních nástrojů/systémů pro analýzu kvantitativní PCR (QPCR) v reálném čase je získávání hodnot Ct a jejich široké použití v aplikacích detekce patogenů známé každému.S rozvojem průmyslu a pokrokem v technologii se zařízení a činidla QPCR setkaly s příležitostmi a výzvami.Yiou Think Tank (2021 Research Report on China's Genetic Testing Industry: Technology) analyzoval, že většina společností v odvětví QPCR mé země čelí běžným problémům založeným na technologii.V reakci na tyto problémy se řešení dělí především na dva typy: urychlení zlepšování technologií a nasazení nových technologií.
POCT pro molekulární diagnostiku QPCR je jedním z vývojových směrů v tomto odvětví a zlepšení výkonu je důležitým faktorem pro urychlení aplikace technologie.Jak u zařízení POCT s jednovzorkovou propustností QPCR optimalizovat hodnotu Ct klíčového parametru jedné reakce ve výzkumu a vývoji?Stejné vybavení, stejný reakční systém a stejná koncentrace templátu, teoreticky čím větší je hodnota Ct jedné reakce, tím nižší je účinnost enzymu v reakci.
V procesu zlepšování účinnosti enzymatické reakce a optimalizace hodnoty Ct může být nejprve analyzována typická 40 PCR cyklů fluorescenční kvantitativní amplifikační křivka.Křivka amplifikace na obrázku níže je rozdělena na fázi fluorescenčního pozadí, fázi exponenciální amplifikace, lineární fázi a fázi plateau.Aby bylo dosaženo nižšího fluorescenčního pozadí, pokud je to možné, odlišit jej od fluorescenční hodnoty časné exponenciální amplifikace, je nutné testovat z reakčního spotřebního materiálu, nosiče, screeningu návrhu primerové sondy a systému reakčního pufru.Perioda exponenciální amplifikace je nejpřímější reakcí enzymové aktivity a je také důkazem dokonalé koordinace POCT zařízení, reakčních nosičů a činidel.V tuto chvíli je třeba upravit a otestovat ve všech aspektech řízení teploty zařízení, získávání a analýzu optického signálu, biokompatibilitu nosiče a výkonnost systému reagencií.Nakonec je celá amplifikace dokončena a výsledky musí být prezentovány přesným datovým algoritmem, aby se získala rozumná hodnota Ct.
Malým krokem v optimalizaci hodnoty Ct je nespočet kroků pracovníků VaV.V úzkosti a vzrušení dne a noci, pokaždé, když „hory a řeky nejsou nikde vidět, vrby jsou tmavé a květiny jasné a je tu další vesnice“, což nám dodává odvahu a vášeň jít vpřed znovu.
Čas odeslání: 29. září 2022